ISOLATION OF THE CATALYTIC SUBUNITS OF CYCLIC AMP-DEPENDENT PROTEIN-KINASES FROM DIFFERENT MAMMALIAN-TISSUES ON THE BASIS OF CHARGE DIFFERENCES OF THEIR SUBUNITS

Die experimentellen Daten und eine Literaturübersicht weisen übereinstimmend auf charakteristische Ladungsunterschiede in den Untereinheiten cAMP-abhängiger Pro-tein-Kinasen verschiedener Säugergewebe hin: Die Holoenzyme beider Typen (Isoenzym I und II) fokussieren im Bereich pH 4.5-5.5, während die cAMP-bindenden (regulatorischen) Untereinheiten unter pH 4 und die katalytischen Untereinheiten bei pH 6.7-9.1 fokussieren. Um die katalytischen Untereinheiten zu reinigen, wurden die anionischen Holoenzyme verschiedener Ratten- und Kaninchenorgane sowie Zellkulturen (Mensch;Maus) an DEAE-Cellulose adsorbiert. Je nach Isoenzymmuster wurde die katalytische Untereinheit dann bei entsprechender Ionenstärke mit geringen Mengen des zyklischen Nucleotids selektiv eluiert. Extraktion der Gewebe mit Triton X-100 erhöhte die Enzymausbeuten. Eine Verbesserung der Enzymelution wurde durch Verwendung von 8-(4-AminobutyJ)amino-cAMP anstelle von cAMP erzielt. Das Enzym kann durch Chromatographia an Carboxymethyl-Cellulose konzentriert und, falls nötig, weiter gereinigt werden. © 1979 Walter de Gruyter & Co.