MODIFICATION OF PYRUVATE-KINASE ACTIVITY BY PROTEINS FROM CHICKEN LIVER

Es wird die partielle Reinigung von Proteinfraktionen beschrieben, die Pyruvat Kinase-Isoenzyme hemmen. Der Inhibitor wurde aus dem (NH4)SO4-Fällungsschritt der Pyruvat Kinase-Reinigung aus Hühnerleber (Eigenbrodt, E. & Schoner, W. (1977) Hoppeseyler's Z. Physiol. Chem. 358, 1033-1046) gewonnen durch Extraktion mit 1n NaOH, Ansäuerung auf pH 3, Ethanolpräzipitation und Chromatographia des Überstandes an DEAE-Cellulose; eine Reinigung in der Disc Elektrophorese in einem Gradienten-Gel von 10-25% Acrylamid schloß sich an, die aktivierende Proteine von der Inhibitor Fraktion abtrennte. Die Inhibitor Fraktion hemmt die Isoenzyme der Pyruvat Kinase des Huhnes in nachstehender Reihenfolge abnehmender Wirkung: M2 > L > M1. Die Hemmung ist auf eine Abnahme der Affinität zu Phosphoenolpyruvat zurückzüfuhren. Der Inhibitor ist stabil gegen Erhitzen für 5 min in 1 % Natriumdodecylsulfat bei 100 °C. Pepsin-Ver-dauung zerstört die Inhibitor-Wirkung. Die Inhibitorfraktion konnte nur durch Dodecylsulfat-Gel-Elektrophorese weiter aufgetrennt werden in 2 Inhibitoren (Mr = 33 500 ± 8500 und Mr = ca. 5 000), einen Aktivator (Mr = 15 100 ± 5 200) und ein bisher nicht identifiziertes Protein (Mr = 27000). © 1979 Walter de Gruyter & Co.