人参皂苷Rh2对人肝癌细胞HepG2/ADM耐药逆转作用及其机制研究

目的人参皂苷Rh2能抑制多种恶性肿瘤细胞增殖,但缺少Rh2对多药耐药的肝癌细胞的敏感性研究。文中主要探讨人参皂苷Rh2对人肝癌细胞株HepG2/ADM多药耐药性[盐酸多柔比星(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)]的逆转作用及机制。方法 MTT法检测(0～250μg/m L)Rh2对HepG2/ADM细胞活力的影响;MTT法筛选最佳逆转耐药的Rh2浓度。细胞分为空白对照组、ADM组和ADM+40μg/m LRh2组。空白对照组:不加药物处理;ADM组:给予ADM处理48 h;ADM+40μg/m LRh2组:给予40μg/m L的Rh2预处理30 min后,给予ADM处理48 h。流式细胞术检测Rh2对细胞内Rh-123荧光强度的影响;RT-PCR法检测MDR1基因的表达;Western blot检测P-gp、Bax、Bcl-2、cleved caspase-3蛋白水平。结果与HepG2细胞相比,HepG2/ADM对ADM、DDP、5-FU、VCR 4种化疗药物的耐药指数分别为32.95、4.63、4.20、4.81。经过40μg/m L的Rh2作用HepG2/ADM细胞48 h后,耐药细胞对4种化疗药的敏感性增强且IC50明显下降,其耐药性的逆转倍数分别为3.70、3.53、2.64、2.55倍。耐药细胞内储留的Rh-123的荧光强度通过流式细胞仪检测结果显示,与ADM组比较,加入40μg/m L Rh2后,细胞内Rh-123的荧光强度明显增高(65.83±1.78 vs 78.21±1.26,P<0.01)。RT-PCR结果显示,ADM+40μg/m L Rh2组MDR1表达较ADM组显著降低(0.48±0.02 vs 0.86±0.05,P<0.05)。Western blot结果显示,ADM+40μg/m L Rh2组P-gp蛋白水平亦较ADM组明显降低(0.97±0.04 vs 1.91±0.03,P<0.01);ADM+40μg/m L Rh2组Bax和cleaved caspase-3表达较ADM组明显增加(1.76±0.04 vs 1.25±0.02,38.26±5.45 vs 0.42±0.04,P<0.05),同时发现Bcl-2表达明显减少(1.25±0.05 vs 1.86±0.03,P<0.05)。结论人参皂苷Rh2能有效逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性,其作用机制可能与降低MDR1、P-gp表达、增加细胞内药物积累以及介导Bax/Bcl-2信号通路有关。