绿色荧光蛋白-小鼠纤维介素蛋白融合基因表达载体的构建和表达

目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)和小鼠纤维介素蛋白(mfgl2)的融合蛋白表达载体,在仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达,为mfgl2的RNA干扰体外研究提供简便的判断手段。方法:用PCR从mfgl2cDNA文库中扩增出mfgl2cDNA片段,插入到GFP表达载体pEGFP N2中GFP基因序列的上游,构建成GFP mfgl2融合基因表达载体pEGFP mfgl2,将该载体转染到CHO细胞后24～48h,通过荧光显微镜观察并摄片。结果:扩增出长约1.3kb的基因片段,经双酶切鉴定和测序鉴定无误;重组载体转染CHO细胞后,在荧光显微镜下可观察到GFP的表达。结论:成功构建了pEGFP mfgl2融合基因表达载体;重组载体可在CHO细胞中表达出GFP mfgl2融合蛋白,为下一步进行mfgl2RNA干扰研究提供了简便的判断手段。