抗CPV-2a单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

被引：6

作者：

王净 ^{[1
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李刚 ^{[2
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王鹏 ^{[3
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曾妮 ^{[2
]}

穆秀明 ^{[1
]}

高志花 ^{[1
]}

王慧文 ^{[1
]}

史利军 ^{[2
]}

机构：

[1] 河北北方学院动物科技学院

[2] 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

[3] 河北北方学院农林科技学院

来源：

基因组学与应用生物学 | 2011年 / 30卷 / 03期

关键词：

犬细小病毒; 单克隆抗体; 双抗体夹心ELISA;

D O I：

暂无

中图分类号：

S858.292 [犬];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

犬细小病毒病是危害养犬业的重要传染病之一,患病犬难以治愈。单克隆抗体治疗此病效果明显,本文介绍了制备抗CPV-2a单克隆抗体的方法。用纯化的犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)2a型分离株免疫新西兰大白兔和Balb/c小鼠制备抗CPV-2a多克隆抗体及单克隆抗体。经亚克隆得到1H9、2B5、2B7和2C7共4株单抗,Western blotting鉴定单抗的免疫反应性;间接ELISA方法检测单抗的特异性。为了快速对犬细小病毒病作出诊断,建立了CPV-2a双抗夹心ELISA方法。兔多抗作为捕获抗体,鼠单抗作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG作为检测系统;捕获抗体和示踪抗体最佳稀释度分别为1:800和1:2000;检测系统最佳稀释度为1:4000。结果表明:所得4株单抗与pET-32a-VP2蛋白发生特异性反应,且与狂犬病毒(RV)、犬温热病毒(CDV)不交叉反应;建立的双抗夹心ELISA方法对病毒的最低检出量为4.375μg/mL,与美国RB试剂盒相比,符合率为95%。单抗制备为犬细小病毒病的治疗奠定了基础;双抗夹心ELISA方法的建立为疑似粪便样本提供了简单、快速和可靠的检测手段。

引用

页码：357 / 363

页数：7

共 5 条

[1] Phylogenetic analysis of the VP2 gene of canine parvoviruses circulating in China [J].

Zhang, Renzhou ;

Yang, Songtao ;

Zhang, Wei ;

Zhang, Tao ;

Xie, Zhijing ;

Feng, Hao ;

Wang, Shujun ;

Xia, Xianzhu .

VIRUS GENES, 2010, 40 (03) :397-402

[2] Sequence analysis of a canine parvovirus isolated from a red panda (Ailurus fulgens) in China [J].

Qin, Qin ;

Loeffler, I. Kati ;

Li, Ming ;

Tian, Kegong ;

Wei, Fuwen .

VIRUS GENES, 2007, 34 (03) :299-302

[3] Evolution of canine parvovirus - A need for new vaccines? [J].

Truyen, Uwe .

VETERINARY MICROBIOLOGY, 2006, 117 (01) :9-13

[4]

Canine parvovirus infection: Which diagnostic test for virus?[J] . Costantina Desario,Nicola Decaro,Marco Campolo,Alessandra Cavalli,Francesco Cirone,Gabriella Elia,Vito Martella,Eleonora Lorusso,Michele Camero,Canio Buonavoglia.Journal of Virological Methods . 2005 (1)

[5]

Evaluation of a novel diagnostic test for canine parvovirus .2 Drane D P,Hamilton R C,Cox J C. Veterinary microbiology . 1994

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