胎儿心肌细胞培养方法的建立

目的 :建立胎儿心肌细胞原代培养和传代培养的方法。　方法 :用 2 g/L胰蛋白酶 (trypsin)和 1g/L胶原酶 (collagenase)进行消化 ,用差速粘附贴壁法纯化心肌细胞 ,用IMDM (Iscove改良的Dulbeccomedium)培养液培养 ,于倒置显微镜下观察 ,用锥虫蓝 (trypanblue)染色法做心肌细胞质量评价。心肌细胞进行actin免疫组化、myo globin荧光免疫组化和电镜分析。　结果 :心肌细胞存活率为 99% ,2 4h后见有 95 %细胞贴壁 ,心肌细胞达 95 % ,形态为圆形、梭形、椭圆形、棒状、星状及分叉状等 ;actin和myoglobin荧光免疫组化强阳性 ,电镜见心肌细胞结构存在 ;原代培养第 2 0天和传代培养第 5天心肌细胞生长良好。　结论 :本方法可很好地用于胎儿心肌细胞原代培养和传代培养 ,为进一步建立心肌病理模型打好基础