正交设计优化狗牙根SSR-PCR反应体系

以SDS法提取的狗牙根（Cynodon spp.）叶片DNA为模板,应用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物和DNA聚合酶4种因素三个水平,对SSR扩增效果进行研究,并通过比较不同浓度模板DNA的浓度对PCR扩增的影响,确立适合狗牙根SSR-PCR反应的最佳体系。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响,狗牙根SSR-PCR优化反应体系为:10×buffer、60 ng模板DNA、Mg2+2.5 mmol/L、dNTP 200μmol/L、primer 0.8μmol/L和Taq DNA聚合酶0.5U,总体积10μL。运用该体系对包括三种10份优良坪用型狗牙根进行了检验,证明该体系稳定可靠。这一优化体系的建立为今后利用SSR标记技术进行狗牙根遗传多样性研究、种质资源鉴定以及亲缘关系分析等提供依据。