TGF-βRⅡ/Fc融合基因真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

被引：1

作者：

李圣青

李焕章

杨乔欣

王吉村

倪殿涛

戚好文

机构：

[1] 第四军医大学西京医院呼吸内科

[2] 第四军医大学基础部微生物学教研室

[3] 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室

[4] 第四军医大学西京医院呼吸内科陕西西安

[5] 陕西西安

来源：

第四军医大学学报 | 2002年 / 04期

关键词：

肺疾病,间质性; 肺纤维化; 受体,转化生长因子β; 克隆,分子; 真核细胞;

D O I：

暂无

中图分类号：

R563.9 [其他];

学科分类号：

1002 ; 100201 ;

摘要：

目的　构建 TGF- βR / Fc融合基因的真核表达载体 p Ig- TR ,使其在中国仓鼠肾细胞 (CHO)中呈分泌性表达 ,为肺间质纤维化基因治疗的研究奠定基础 .方法　采用RT- PCR方法从正常人肺组织中扩增出目的基因 TGF- βR c DNA的胞膜外部分 ,再将 TGF- βR c DNA片段亚克隆到p Ig 真核表达载体 ,该载体在其多克隆位点下游含有人Ig G1 Fc基因组片段 ,由此可形成 TGF-βR / Fc融合基因 ;采用脂质体转染技术转染 CHO细胞使其瞬时表达融合蛋白 ;应用细胞免疫荧光技术检测融合蛋白的表达 ;采用免疫沉淀的方法检测 CHO细胞培养上清内融合蛋白的表达 .结果　DNA测序结果在 Blast上作同源性比较证明插入片段就是TGF-βR c DNA的胞膜外部分 ,细胞免疫荧光染色呈阳性反应 ,CHO细胞培养上清内检测到融合蛋白的表达 .结论　p Ig- TR 真核表达载体构建成功 ,并能够在 CHO细胞中分泌性表达有活性的融合蛋白 TGF-βR / Fc

引用

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