原发性肝癌肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞的特征性差异基因

目的:探讨原发性肝癌肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞的特征性差异基因。方法:选取肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证肝癌患者作为研究对象,以肝肾阴虚证肝癌患者为试验组,以非肝肾阴虚证肝癌患者作为对照组;选用全基因组表达谱芯片,研究肝肾阴虚证的基因表达谱,并进行差异表达基因分析,基于Gene Ontology(http://www.geneontology.org/)和KEGG(http://www.genome.jp/kegg/)数据库对差异基因进行功能(gene ontology,GO)和通路(pathway)注释,并选取显著性差异基因构建共表达网络图。扩大样本量,运用实时荧光定量聚合酶链反应与蛋白质印迹法分别从mRNA及蛋白层面对显著性差异基因进行验证。结果:肝肾阴虚证组和非肝肾阴虚证组间存在差异基因表达特征图谱,获得差异表达的基因共615个。GO注释后,差异基因表达具有278个显著性功能差异,主要涉及跨膜转运、细胞周期停滞、细胞转录、诱导凋亡等。Pathway标记后,上调差异基因参与显著性信号转导通路16项,下调差异基因参与显著性信号转导通路10项,包括抗原加工与递呈转导通路、代谢途径转导通路、细胞周期转导通路、蛋白质输出转导通路等。用差异基因构建共表达网络图,筛选出3个显著性差异基因(SEC62[SEC62 homolog(S.cerevisiae)]、CCNBl[cyclin B1]、BIRC3[baculoviral IAPrepeat-containing 3])。扩大样本量进行验证,肝肾阴虚证肝癌患者SEC62、CCNB1、BIRC3基因的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)表达水平均显著低于非肝肾阴虚证肝癌患者。结论:本研究从基因组学的角度反映出肝肾阴虚证肝癌患者与非肝肾阴虚证肝癌患者之间存在着差异表达基因,进一步证实了"证"是多基因在mRNA和(或)蛋白质水平发生改变并导致人体偏离正常状态的假说。