人p53/荧光蛋白融合基因在高转移人肝癌细胞中的表达与定位

目的观察ｐ５３基因在肝癌细胞中的正常表达及定位情况。方法根据野生型ｐ５３基因的编码顺序，ＰＣＲ方法扩增突变的ｗｔ－ｐ５３基因，使其３’端的终止密码ＴＧＡ突变为ＴＧＧ；用基因重组技术将其与绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ， ＧＦＰ）融合，通过真核表达质粒一脂质体介导，导入人高转移肝癌细胞系ＭＨＣＣ９７（ＰＣＲ检测有ｐ５３基因突变）中。用荧光显微镜观察ｐ５３的表达情况。结果ＭＨＣＣ９７细胞中存在ｐ５３基因第２４９位的突变，而低转移入肝癌细胞ＬＤ２０则无此突变。ＤＮＡ顺序测定表明：ｗｔ一ｐ５３基因与ＧＦＰ基因达到编码框架内融合。荧光显微镜显示在空白载体ｐＥＧＦＰ－Ｎ１转染的ＭＨＣＣ９７细胞中荧光布满整个细胞，在转染阳性载体ｐＥＧＦＰ－５３的ＭＨＣＣ９７细胞中荧光仅聚集在细胞核中。结论ｐ５３基因第２４９位上的突变可能与肝癌细胞的转移特性有关；转染的人高转移肝癌细胞系ＭＨＣＣ９７能高效表达ｐ５３蛋白，并定位于细胞核内，与野生型ｐ５３基因的表达方式相同。