关节康片干预软骨稳态保护膝骨关节炎小鼠关节软骨

背景：既往研究发现，关节康片能够改善膝骨关节炎患者关节疼痛及功能，但具体机制尚未明确。目的：探讨关节康片对膝骨关节炎模型小鼠软骨保护的作用机制。方法：网络药理学方法获取关节康片和软骨稳态的共同靶点，构建蛋白质相互作用网络，通过GO分析及KEGG富集分析筛选关键信号通路。动物实验将小鼠随机分为对照组、模型组、关节康低、中、高剂量组、盐酸氨基葡萄糖胶囊组(阳性药物)，后5组小鼠采用改良Hulth法构建小鼠膝骨关节炎模型，对照组小鼠手术仅暴露相关组织，不切除韧带及半月板。造模成功后关节康低、中、高剂量组分别予187.5,375,750 mg/kg关节康片混悬液灌胃，盐酸氨基葡萄糖胶囊组予盐酸氨基葡萄糖混悬液187.5 mg/kg灌胃，模型组、对照组予等量生理盐水灌胃，隔日1次给药，共8周。灌胃结束后，通过苏木精-伊红和番红O-固绿染色观察小鼠膝关节软骨病理形态，并进行软骨OARSI评分，免疫组化染色检测小鼠软骨组织中Sox9、Ⅱ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶13的蛋白表达。结果与结论：(1)共获得关节康片与软骨稳态交集靶点140个，Sox9为靶点之一；(2)GO分析和KEGG富集分析显示主要涉及的通路有癌症相关通路、缺氧诱导因子1、MAPK、PI3K/Akt、核因子κB、转化生长因子β等信号通路；(3)苏木精-伊红染色及番红O-固绿染色结果显示，与对照组相比，模型组软骨轮廓形变，缺损分层，软骨细胞数量明显减少，潮线模糊，OARSI评分高；与模型组相比，关节康各剂量组软骨表面完整，软骨厚度及软骨细胞数量增加，潮线清晰，OARSI评分均明显降低；(4)免疫组化结果提示，与对照组相比，模型组Sox9、Ⅱ型胶原蛋白表达明显降低，基质金属蛋白酶13表达明显升高(P<0.01)；与模型组相比，关节康各剂量组基质金属蛋白酶13表达明显减少(P<0.01)；关节康片中、高剂量组的Sox9、Ⅱ型胶原蛋白阳性表达均明显提高(P<0.01)，且从低剂量到高剂量组阳性表达呈增加趋势(P<0.01)；(5)结果表明，关节康片可通过调控Sox9干预软骨稳态，在膝骨关节炎中发挥软骨保护作用，缺氧诱导因子1、MAPK、PI3K/Akt、核因子κB、转化生长因子β等信号通路可能是关节康片干预软骨稳态的主要通路。