军团菌双重PCR检测方法的建立及其应用研究

目的　建立一种双重PCR方法 ,用于简便 ,快速检测军团菌。方法　根据军团菌 16SrRNA基因和mip基因序列设计合成引物 ,可以扩增 386bp 16SrRNA基因和 2 0 6bpmip基因片段。用该方法对军团菌标准参考菌株和 47份临床标本进行了检测。结果　通过一次PCR反应 ,不仅能够检测嗜肺军团菌 ,而且能够检测非嗜肺的军团菌 ,从而克服了单一引物应用时的不足。 2 1株对照菌株扩增阴性 ,最小检出限为 2× 10 1 cfu/ml。 47份临床标本 (包括 12份血 ,2 0份支气管肺泡灌洗液 ,7份胸水 ,8份痰 )PCR检测的阳性标本为 2 8份 (2 8/4 7) ,在临床上均支持为军团菌感染 ,高于血清抗体检测的阳性标本数 (2 4/4 7)。结论　该方法用于军团菌的检测简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 ,为未来军团病分子流行病学调查及临床早期诊断提供了有效的检测手段