大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的超广谱β-内酰胺酶和质粒AmpC型β-内酰胺酶的分子流行病学研究

目的研究北京大学第三医院分离的大肠埃希菌（E．coli）和肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）中超广谱β-内酰胺酶（ESBL）和质粒AmpC型β-内酰胺酶（p-AmpC）的分子流行病学特征。方法收集2003年6月至2004年7月无重复临床分离E．coli和Kon共293株,对其中产ESBL和/或p-AmpC的86株进行研究。采用琼脂稀释法测定抗生素最低抑菌浓度；等电聚焦电泳测定β-内酰胺酶等电点；接合实验判断β-内酰胺酶基因位置和移动性；PER及其产物测序确定基因型；ERIC/ BOX-PER判断菌株克隆性（E．coli菌株分型同时结合种系进化群PCR结果）。结果PER产物测序结果显示：我院E．coli和Kpn中只产生ESBL、只产生p-AmpC、同时产生两种酶菌株的发生率分别是30．8％（60/195）、17．3％（17/98）、0．5％（1/195）和1．0％（1/98）、0．5％（1/195）、6．0％（6/98）；E．coli中ESBI以CTX-M-14型酶为主（70．5％）,Kpn中则以CTX-M-3（30．4％）、CTX-M-9（30．4％）、CTX-M-14 （21．7％）常见,p-AmpC均为DHA-1型；发现blaCTX-M-52（GenBank登录号DQ223685）,该基因编码的β-内酰胺酶和CIX-M-3相比有两处点突变（A77V和P167S）,导致对头孢他啶的水解活性比头孢噻肟高(临床株相应接合子MICCTX=16μg/ml,MICCAZ≥256μg/ml)。产酶株多数呈多重耐药,对美罗培南敏感。E．coli种系进化群D群以一个克隆株为主,而Kpn则以两个克隆株常见。结论我院存在分别或同时产生ESBL和p-AmpC酶的E．coli和kpn,相应常见酶型分别是CTX-M型和DHA型,菌株间呈一定程度的同源性。应对产生两类酶的菌株进行持续的表型监测和深入的机制研究。