乌司他丁对血管内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及机制

目的探讨乌司他丁对人脐静脉内皮细胞（ECV）-304氧化应激损伤的保护作用及机制。方法将实验用ECV-304细胞分为5组:正常组不做任何处理;模型组及乌司他丁低、中、高剂量组均先以200μm H2O2诱导氧化应激损伤,之后乌司他丁低、中、高剂量组分别加入750、1 500、3 000 U/ml乌司他丁处理。ECV-304细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,将处于对数生长期的ECV-304细胞用于检测。MTT法检测细胞活力,二氯荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）荧光定量法检测细胞内活性氧（ROS）水平,酶联免疫吸附法（ELISA）检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量,Gries法检测一氧化氮（NO）含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,分光光度法检测含半胱天冬酶3（Caspase 3）活性,Western blot分析细胞中凋亡蛋白Bax、Bcl-2含量变化及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）通路的激活状况。结果与正常组比较,模型组中ECV-304细胞活力下降,ROS及MDA含量上升,SOD和NO含量下降,Caspase 3活性上升,Bax表达量提高,Bcl-2、PI3K及磷酸化AKT（P-AKT）表达量下降,差异均具有统计学意义（P均<0.01）;与模型组比较,乌司他丁各给药组均能显著抑制上述模型组变化,差异均具有统计学意义（P均<0.05）。结论乌司他丁通过抑制ROS等物质的产生及细胞凋亡可抵抗H2O2诱导的ECV-304细胞氧化应激损伤,机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。