单增李斯特氏菌溶血素基因的克隆及原核表达

被引：1

作者：

吴晓薇 ^{[1
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徐成刚 ^{[1
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马保华 ^{[4
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江经纬 ^{[1
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叶贺佳 ^{[1
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区燕宜 ^{[1
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徐小芹 ^{[1
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廖明 ^{[1
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机构：

[1] 华南农业大学兽医学院

[2] 广东检验检疫技术中心

[3] 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室

[4] 南海出入境检验检疫局

来源：

中国动物检疫 | 2011年 / 28卷 / 08期

关键词：

单核细胞增生性李斯特氏菌; 溶血素基因; 克隆; 原核表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.61 [病原细菌];

学科分类号：

090601 ;

摘要：

参考GenBank收录的单增李斯特菌Hly基因序列,设计1对引物,采用PCR技术扩增出单增李斯特氏菌的溶血素基因Hly(不含有信号肽部分),得到一条1590bp的条带。将其连入pMD18-T载体,经酶切、PCR鉴定和序列测定法进行鉴定。测序正确后,将该基因插入到pET-28a中构建原核表达载体pET-28a-sHly,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果显示,Hly基因可以在大肠杆菌中获得表达,表达产物分子质量约为65kU,与预期蛋白质分子质量大小一致。经Western-blotting鉴定可知,诱导表达产物以可溶形式存在,可被兔抗LM阳性血清特异识别,具有较好的抗原活性,为进一步研制基于溶解素蛋白的诊断抗原和特异性单克隆抗体,开展LM的致病与免疫机理研究奠定基础。

引用

页码：46 / 50

页数：5

共 5 条

[1] 单核细胞增生李斯特菌毒力因子研究进展 [J].