降钙素对破骨细胞增殖和凋亡的调节作用

目的:降钙素对破骨细胞作用的研究以往主要集中在对破骨细胞骨吸收功能的调节上,实验通过观察不同浓度的降钙素对体外培养破骨细胞增殖及凋亡率的影响,进一步探讨降钙素对破骨细胞的作用机制。方法:实验于2006-08/2007-06在郑州大学医学院药理实验室完成。应用1dSD大鼠乳鼠,采用骨髓诱导法体外培养破骨细胞,并接种于盖玻片和骨磨片上。培养液中分别加入0,10-12,10-10,10-9,10-8mol/L的降钙素作用于大鼠破骨细胞,0mol/L为对照组。以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法证实培养的破骨细胞,并于培养48h后观察破骨细胞数目、形态的变化;应用流式细胞仪检测不同浓度的降钙素对破骨细胞凋亡率的影响。结果:①破骨细胞的一般形态:破骨细胞较其他细胞大,形态不规则者,呈油煎蛋形、长条形、腊肠形或漏斗形等,细胞内可见几个至几十个核不等。抗酒石酸酸性磷酸酶活性部分为酒红色,颗粒状。②抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数:不同浓度降钙素培养液作用48h后,对盖玻片上的阳性细胞计数发现,破骨细胞数目随着降钙素浓度增加而减少(P<0.05),并且降钙素对破骨细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖效应。③破骨细胞凋亡率:不同浓度的降钙素均有增加破骨细胞凋亡率的作用,且呈剂量依赖效应,10-10mol/L以上浓度的降钙素明显促进破骨细胞的凋亡效率(P<0.05)。结论:降钙素抑制破骨细胞的增殖,促进破骨细胞骨凋亡,从而抑制破骨细胞的骨吸收功能,并呈剂量相关性。