北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1的表达分析及其原核表达与蛋白纯化

被引：15

作者：

陶韵文 ^{[1
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徐洁森 ^{[1
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魏建和 ^{[1
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孙晶 ^{[1
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徐艳红 ^{[1
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杨欣 ^{[1
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张岩 ^{[1
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刘娟 ^{[2
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隋春 ^{[1
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机构：

[1] 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所

[2] 佳木斯大学药学院

[3] 东北林业大学生命科学院

来源：

药学学报 | 2013年 / 08期

基金：

北京市自然科学基金;

关键词：

北柴胡; UGT基因; 茉莉酸甲酯诱导表达; 组织表达; 原核表达; 蛋白纯化;

D O I：

暂无

中图分类号：

S567.79 [];

学科分类号：

摘要：

本研究分析了北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1 ORF序列,预测了其蛋白三维结构,利用qRT-PCR分析了BcUGT1的茉莉酸甲酯诱导表达和组织表达特性。结果表明,BcUGT1可能参与柴胡皂苷生物合成。随后,构建了BcUGT1原核表达载体,成功诱导出目标蛋白,并进行了纯化。原核表达实验中共采用了3种载体:pRSET-A、pET-28a(+)和pET-30a(+),3种宿主菌:BL21(DE3)plysS、BL21A1和BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,进行了不同诱导条件的探索,包括不同诱导物(L-阿拉伯糖和IPTG)的不同浓度、不同诱导时间和温度,结果以pET-28a(+)和pET-30a(+)为载体,BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL为宿主菌,0.5或1 mmol.L 1IPTG,16℃,20 h为条件,诱导出目标蛋白。利用PrepEase His标签蛋白纯化试剂盒,纯化获得了目标蛋白,为后续开展BcUGT1基因的功能研究奠定了基础。

引用

页码：1345 / 1352

页数：8

共 11 条

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