抗真菌鲎素基因在大肠杆菌中的表达

人工设计并合成了抗真菌多肽鲎素基因。将合成的鲎素基因首先克隆到ｐＵＣ１８载体上，利用通用引物测序，获得了与预期碱基序列完全一致的目的基因。再将鲎素基因克隆到原核表达载体ｐＧＥＸ－５Ｘ－１上，诱导表达融合蛋白。经ＩＰＴＧ诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行检测，在２９ｋＤ处出现ＧＳＴ－鲎素融合蛋白条带，与预期分子量大小相一致。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证实了该融合蛋白的表达。在３７℃下诱导表达的ＧＳＴ－鲎素融合蛋白完全不溶解，以包涵体的形式出现；而在３０℃诱导表达时，有少部分融合蛋白是可溶的。利用ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ对可溶性的融合蛋白纯化后，纯化产物具有抑制黄曲霉孢子萌发的生物活性。