猪繁殖与呼吸综合症病毒分离毒株基因型的鉴定

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型参考毒株ＡＴＣＣＶＲ－２３３２株ＯＲＦ７及部分３＇端非编码区（ＵＴＲ）基因序列，设计合成了一对美洲型毒株特异性引物，采用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地从６株ＰＲＲＳＶ国内分离株ＢＪ１～６株中扩增出与预期大小相同的基因片段，大小约５７１ｂｐ，与美洲型参考毒株ＡＴＣＣＶＲ－２３３２株扩增产物大小相似。扩增产物经限制性内切酶ＰｖｕⅡ酶切作ＲＦＬＰ分析证实ＲＴ－ＰＣＲ产物确为ＰＲＲＳＶ美洲型ＯＲＦ７及部分３＇ＵＴＲ。以该引物对ＰＲＲＳＶ欧洲型ＬＶ株及未感染ＰＲＲＳＶ的ＨＳ．２Ｈ细胞进行同样的ＲＴ－ＰＣＲ扩增没有检测到任何扩增条带。ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＦＬＰ分析结果表明，这６株分离毒株基因型属于美洲型，与单克隆抗体间接免疫荧光试验结果一致。此外，还对ＲＴ－ＰＣＲ检测ＰＲＲＳＶＲＮＡ的样品处理方法作了初步研究，结果表明该方法可用于直接从ＰＲＲＳＶ感染的细胞单层和培养物上清中检测ＰＲＲＳＶＲＮＡ，从而为ＲＴ－ＰＣＲ应用于ＰＲＲＳＶ临床诊断奠定了基础。