清醒自由活动大鼠脑酪氨酸羟化酶活性的测定

目的 :建立清醒自由活动大鼠脑内酪氨酸羟化酶 (TH)活性的测定方法。方法 :应用脑微透析技术收集经 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)预处理的大鼠 ,在L 芳香族氨基酸脱羧酶抑制剂 3 羟苄肼·盐酸 (NSD10 15 )灌流下 ,脑纹状体细胞外的透析液 ;用高效液相色谱 电化学检测方法测定透析液内多巴 (DOPA)水平 ,来反映脑内TH的活性。并观察TH抑制剂以及多巴胺受体的抑制剂和激动剂对其的影响。结果 :预先用 6 OHDA处理导致大鼠纹状体透析液内DOPA缺失 ,用NSD10 15阻断DOPA向多巴胺 (DA)转化 ,可测得DOPA的水平 ,且DA的代谢产物 3,4 二羟基苯乙酸水平逐步下降。但在TH抑制剂α 甲基 ρ 酪氨酸作用下DOPA又可消失 ,说明测定的DOPA是来自多巴胺神经末梢。另外 ,腹腔内给予多巴胺受体激动剂盐酸阿朴吗啡后 ,脑透析液中DOPA水平减少 ;而给予多巴胺受体抑制剂氟哌啶醇后 ,微透析液中DOPA水平增加。本研究测得在 0 .0 1mmol·L-1NSD10 15灌流下 ,经 6 OHDA预处理的 ,插入探针 2 4hSD大鼠纹状体中DOPA水平为 (0 .39± 0 .12 ) pmol·min-1(x±s,n =5 )。结论 :在脱羧酶抑制剂NSD 10 15灌流期间 ,测得预先用 6 OHDA处理大鼠纹状体透析液中DOPA水平可以认为是脑组织TH活性的指数 ,经工具药验证 ,在体监测脑TH活性的方法是可