膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制的研究

目的使用膝关节骨性关节炎(OA)临床组织标本与人软骨细胞株(NHAC),以分子生物学手法探讨WISP-1在骨关节软骨基质合成和分泌中的调控机理,明确其在骨性关节炎中的作用。方法 NHAC细胞以1.4×106/m L密度播种于6孔板(直径3.5 cm)后培养48 h,于含有0.2%牛血清白蛋白(BSA)的DF中继续培养12 h,使细胞处于静止状态。向含0.02%BSA的DF培养基中加入10、50和100 ng/m L的Wnt刺激细胞6 h。对照siRNA与β-catenin siRNA,使用Entranser TM-R(Engreen)转染试剂转染至NHAC。转染24 h后使用PBS清洗细胞两次。向含0.02%BSA的DF培养基中加入50 ng/m L的Wnt刺激细胞。向NHAC负荷不同剂量WISP-1,24 h后观察MMPs和ADAMTS4。利用总RNA提取试剂盒提取组织标本和细胞RNA,反转录产物c DNA作为PCR扩增模板进行定量PCR;使用蛋白提取试剂盒提取蛋白。结果在膝关节组织标本中发现,在骨性关节炎关节软骨中WISP-1、Wnt和b-catenin基因表达及蛋白水平明显增高。在NHAC细胞,Wnt诱导下WISP-1转录水平显著提高,与Wnt呈现剂量依赖关系。经敲除内源性β-catenin表达后,Wnt诱导WISP-1作用明显降低。WISP-1以量依存性的诱导细胞外基质蛋白分解酶MMP3、MMP9、MMP13和ADAMTS4基因表达在软骨细胞中Wnt诱导WISP-1信号途径通过β-catenin的可能性很大。结论 WISP-1与骨性关节炎的发生具有一定的相关性;在软骨细胞中Wnt诱导WISP-1的信号途径通过b-catenin。