尿酸氧化酶基因的克隆、表达及其产物的应用

克隆了产朊假丝酵母 (Candidautilis)AS2 117尿酸氧化酶 (UrateOxidase,Uricase,EC1.7.3 .3)的基因。将此基因插入原核表达质粒pET2 1a后转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得高表达的重组转化子菌株。经IPTG诱导 ,重组尿酸酶基因表达量可达菌体可溶性蛋白的 40 %。重组尿酸氧化酶为有酶活性的可溶蛋白。Western印迹分析证实表达产物有免疫学活性。经DEAEDE5 2纤维素离子交换柱层析纯化 ,目的蛋白纯度可达 95 %。重组蛋白和天然蛋白的理化特征比较证明重组蛋白的热稳定性有较大提高。酶盒配制和临床应用实验表明重组蛋白可代替天然蛋白进行临床血清尿酸的分析。