化学发光加强法核酸标记检测系统用于猪DNA指纹分析的研究

目的　探讨化学发光加强法 (ECL)核酸直接标记和检测系统应用于猪的DNA指纹分析的可行性。方法　采用人源α -珠蛋白 3’HVR探针 ,应用ECL核酸直接标记和检测系统 ,对西双版纳小耳猪进行了Southern杂交DNA指纹分析 ,获得了最适实验条件。结果　取 10 μg基因组DNA于 30 μl反应体系中 ,加入HinfⅠ或HaeⅢ内切酶 3～ 5U/ μgDNA ,酶切消化 4h ,消化液在 5 0V电压条件下 4℃电泳 2 0h ,采用真空转移法进行脱嘌呤、碱变性、中和及转膜 ,时间分别为 15min、 15min及 2 0min ,转膜采用 2 0×SSC真空转移 1h至hybondN +尼龙膜上 ,大大提高了转膜效率。以HRP标记探针进行管中杂交 ,以化学发光法进行检测 ,室温放射自显影 30min ,获得了清晰可辨的DNA指纹图。结论　该方法可用于猪的DNA指纹分析 ,其效果与同位素标记探针的效果基本一致。