应用绿色荧光蛋白研究外源基因在造血细胞的表达调控

被引:6
作者
刘兵
周生
张双喜
孙建民
杨靖清
于晓媅
毛宁
机构
[1] 军事医学科学院基础医学研究所!北京,军事医学科学院基础医学研究所!北京,军事医学科学院基础医学研究所!北京,军事医学科学院基础医学研究所!北京,军事医学科学院基础医学研究所!北京,军事医学科学院基础医学研究所!北京,军事医学科学院
关键词
增强型绿色荧光蛋白基因; 内部核糖体进入位点; 内部启动子; 逆转录病毒载体;
D O I
10.13865/j.cnki.cjbmb.1999.05.004
中图分类号
Q786 [基因的表达];
学科分类号
071007 ; 0836 ; 090102 ;
摘要
以增强型绿色荧光蛋白为报道分子,研究双基因逆转录病毒载体介导小鼠骨髓细胞的基因转移中,SV(simianvirus)40启动子和内部核糖体进入位点(internalribosomeentrysite,IRES)对双基因共表达的影响。构建双基因中间序列分别为SV40启动子和IRES的载体pLESN和pLEIN。经包装获得较高滴度的病毒上清,以共培养的方式感染5-氟尿嘧啶预刺激的小鼠骨髓细胞。流式细胞仪检测表明转染效率约25%,PCR证明EGFP基因整合至骨髓细胞基因组。半固体培养转基因细胞7d,LEIN组获得具有G418抗性的集落中98%表达绿色荧光,而LESN组54%。结果表明:在双基因逆转录病毒载体介导的小鼠骨髓细胞的基因转导中,IRES与内部SV40启动子相比,更能保证双基因的共同表达。
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