成骨细胞与诱导剂对骨髓基质干细胞的增殖与成骨分化的影响

目的探索一种新的骨髓基质干细胞(marrowstromalstemcells,MSCs)增殖与成骨分化的体外诱导培养体系。方法乳大鼠颅骨来源的第3代成骨细胞与诱导剂(1nmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml抗坏血酸)对大鼠股骨、胫骨来源的MSCs生长的影响。于8块24孔板上培养MSCs,每孔接种5×104个第3代MSCs。按培养成分不同分为4组,每组2块。DMEM培养为对照组;诱导剂培养为诱导剂组;成骨细胞培养为成骨细胞组;联合使用成骨细胞与诱导剂培养为联合诱导组。计数诱导1～8d各组MSCs的数量并绘制细胞生长曲线,检测诱导10d的MSCs的碱性磷酸酶活性,采用RT-PCR检测诱导2周时MSCs骨钙素mRNA的表达水平。结果原代及传代MSCs形态正常。细胞生长曲线示MSCs数量均随时间延长增加。成骨细胞组增殖最快,诱导剂组增殖最慢,5～8d成骨细胞组及诱导剂组细胞数量与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。联合诱导组碱性磷酸酶活性为2.01±0.56U与对照组0.68±0.14U、诱导剂组1.27±0.43U及成骨细胞组0.77±0.19U比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组不表达骨钙素mRNA,诱导剂组为0.783±0.094、联合诱导组为0.814±0.071与成骨细胞组0.302±0.026比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论联合使用成骨细胞和诱导剂诱导MSCs,不影响MSCs的正常增殖而促进MSCs的成骨分化,诱导效果较好,可望成为一种新的骨组织工程种子细胞的体外培养体系。