人尿激酶原全长cDNA在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

通过磷酸钙共沉淀技术,将含有尿激酶原cDNA的表达载体（pSV2-proUK）与含有二氢叶酸还原酶基因的表达质粒pSV2-dhfr或MMTV-dhfr共转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶基因缺陷株（CHO-dhfr-）。利用选择培养基选择出二氢叶酸还原酶基因表达阳性（dhfr+）的转化细胞灶。用溶解圈法测定尿激酶型纤溶酶原激活剂（u-PA）的生物活性,其中两株显著高于其他株细胞,命名为CLF-14和CLF-8,表达水平依次为241U/10～6细胞/48h,16IU/10～6细胞/48h。用ELISA测定CLF-14和CLF-8细胞上清,表现为强阳性,阳性值比阴性对照值（P/N）大于10,CLF-14和CLF-8细胞表达量分别为0.14—0.22μg/10～6细胞/48h和0.08—0.14μg/10～6细胞/48h。分泌产物能被抗尿激酶（UK）血清抑制,而不被抗组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）的抗血清和正常兔血清抑制。