重组花生过敏原Ara h2的生物合成

被引：5

作者：

胡纯秋 ^{[1
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高金燕 ^{[1
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罗春萍 ^{[1
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陈红兵 ^{[1
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朱盼 ^{[1
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机构：

[1] 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室

[2] 南昌大学中德联合研究院

[3] 南昌大学生命科学与食品工程学院

来源：

食品科学 | 2010年 / 31卷 / 15期

关键词：

食物过敏; 花生过敏原Ara h2; 生物合成;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q786 [基因的表达];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

为获得重组花生过敏原Ara h2。通过RT-PCR合成cDNA,并以此为模板进行PCR扩增目的基因Ara h2,扩增产物经纯化后克隆至pMD19-TSimple载体中,构建重组质粒pMD19-T-Ara h2。上述重组质粒经酶切纯化后定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-Ara h2,并转化表达宿主菌BL21-codonPlus(DE3)-RIPL中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果表明,该表达蛋白大小约为46kD,与理论值相符。通过Glutathione Sepharose 4B凝胶亲和层析方法纯化融合蛋白GST-Ara h2,获得融合蛋白纯度约为90%。Western blotting分析表明,经纯化的融合蛋白能与抗Ara h2兔血清发生特异性反应,说明该蛋白具有良好的免疫原性。

引用

页码：203 / 207

页数：5

共 4 条

[1] 一种提取花生种子中总RNA的简易方法 [J].

胡纯秋 ;

高金燕 ;

陈红兵 .

食品科学 , 2007, (10) :373-375

[2]

High-yield expression in Escherichia coli , purification, and characterization of properly folded major peanut allergen Ara h 2[J] . Protein Expression and Purification . 2003 (2)

[3]

Hidden peanut allergens detected in various foods: findings and legal measures[J] . Allergy . 2001 (12)

[4] High-level misincorporation of lysine for arginine at AGA codons in a fusion protein expressed in Escherichia coli [J].

Calderone, TL ;

Stevens, RD ;

Oas, TG .

JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, 1996, 262 (04) :407-412

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