人关节软骨细胞培养法的改良及其特有表型的检测

目的探讨简便、易行的人关节软骨细胞体外培养方法。方法 以0.25％胰酶消化软骨块0.5 h,0.30％胶原酶消化4 h后,将软骨细胞与小片软骨(0.2 mm3大小)共同置入预涂多聚赖氨酸的培养瓶中培养;与传统方法对照,用倒置显微镜、免疫组织化学、电镜、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,检测经7次传代后软骨细胞表型改变相伴随的形态学及分子生物学特征。结果改良法培养的细胞活性率可达100％。经多次传代的软骨细胞仍保持原代软骨细胞的表型特征,甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性,并可观察到软骨的特有的细胞-胶原纤维几何构像。而传统法培养的软骨细胞在第7代特有表型出现改变。结论本改良法是一种较方便而且有效的培养法。