葛根素对氧自由基培养的脐静脉内皮细胞ADMA-DDAH系统的影响

目的观察葛根素对氧自由基(oxidized free radical,OFR)培养的人脐静脉内皮细胞(human um-bilical vein endothelial cells,HUVECs)二甲基精氨酸-二甲基赖氨酸水解酶(di methylarginine di methy-laminohydrolase,DDAH)活性及表达的影响,以探讨葛根素对不对称二甲精氨酸(ADMA)代谢机制的影响。方法采用改良的Jaffe法培养原代HUVECs,取生长良好的3～6代HUVECs用于实验,分为(1)空白对照组:加DMEM培养液;(2)OFR组:加入OFR0.1mmol/L;(3)葛根素Ⅰ组:加0.1mmol/L OFR及0.5mg/ml葛根素;(4)葛根素Ⅱ组:加0.1mmol/L OFR和1.0mg/ml葛根素。共孵24h后,检测上清液中NO、NOS活性、ET、ADMA含量、L-胍氨酸(L-cit)浓度,采用Western blotting测定细胞裂解液中DDAH的蛋白表达。结果OFR条件培养下,内皮细胞的代谢产物ADMA、ET含量均较空白对照组高,而NO及NOS的活性减少;反应DDAH酶活性的L-cit浓度显著降低,而DDAH的表达无明显变化。葛根素干预后,ADMA、ET含量较OFR组降低,NOS活性及NO增加,L-cit浓度明显升高。结论OFR培养下,内皮损伤ADMA的增加与DDAH的活性减弱有关,而与DDAH的表达无关。葛根素通过增加DDAH活性促进ADMA代谢,使NOS活性增加,抑制OFR对内皮功能的损伤。