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传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆和鉴定附视频
被引:1
作者
:
陈忠斌
论文数:
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机构:
中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
陈忠斌
徐宜为
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机构:
中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
徐宜为
于康震
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机构:
中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
于康震
王艳华
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机构:
中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
王艳华
袁世山
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机构:
中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
袁世山
王秀丽
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机构:
中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
王秀丽
卢景良
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机构:
中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
卢景良
机构
:
[1]
中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
来源
:
中国兽医学报
|
1997年
/ 01期
关键词
:
传染性法氏囊病病毒,VP2基因,克隆,RT-PCR;
D O I
:
10.16303/j.cnki.1005-4545.1997.01.002
中图分类号
:
S852.65 [家畜病毒学];
学科分类号
:
摘要
:
以鸡胚成纤维细胞培养IBDV弱毒疫苗株D78,经蔗糖密度梯度离心纯化,电镜下见典型IBDV粒子。用SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组,低熔点胶回收,琼脂糖凝胶电泳,可见IBDV典型双节段基因组。根据已发表的IBDV基因组序列,设计并合成了1对特异扩增IBDVVP2基因的引物。以IBDV基因组为模板,利用RT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物,将PCR产物适当处理后与经SmaⅠ酶切的pUC19质粒平端连接,转化大肠杆菌DH5α,在含Amp、Χ-gal和IPTG的琼脂平板上培养,产生大量白色菌落。挑取白色菌落,经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒DNA为模板作PCR检测和部分酶切分析证实,该质粒为含D78IBDVVP2基因的重组pUC19
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