LC-MS/MS法测定人血浆中羟基红花黄色素A的浓度

目的建立LC-MS/MS法测定人血浆中羟基红花黄色素A(QA)的浓度。方法血浆样品中加入等体积0.2 mol·L-1的乙酸铵后,采用固相萃取技术进行提取QA,洗脱液直接进行LC-MS/MS分析。QA和内标异鼠李素-3-O-新橙皮苷(SLS)通过Agilent ZORBAX SB C18(3.0 mm×100 mm,3.5μm)色谱柱进行等度洗脱分离,流动相组成为0.2 mmol·L-1乙酸铵水溶液/甲醇=30/70。质谱检测采用负离子模式,扫描方式为多反应检测,QA的目标离子对为m/z 611.131/490.900,SLS的目标离子对为m/z 623.032/298.800。结果 QA和SLS的保留时间分别2.7 min和3.9 min左右,空白血浆无干扰影响含量测定;血浆中QA的线性范围为8.57～4185μg·L-1(r为0.9949～0.9992),定量下限为8.570μg·L-1,日内日间精密度RSD均小于7%;低、中、高3个浓度下的平均介质效应分别为116.62%、119.06%和115.72%(RSD分别为3.27%、3.42%和4.93%),平均提取回收率分别为77.75%、80.90%和80.76%(RSD分别为1.70%、1.78%和4.15%);血浆样本于室温放置4 h、-70℃反复冻融3次及-70℃冰冻保存31d的情况下均稳定;浓度超出定量上限的QA血浆样本经空白血浆稀释6.25倍后可准确测定。结论建立的测定血浆样本中QA浓度的LC-MS/MS分析方法简便、快速、准确灵敏,适用于QA人体药代动力学的系统研究。