Oenococcus oeni苹果酸-乳酸发酵关键酶基因在酿酒酵母中的转化与表达

被引：12

作者：

李华 ^{[1
]}

刘延琳 ^{[1
]}

蒋思欣 ^{[2
]}

何秀萍 ^{[2
]}

机构：

[1] 西北农林科技大学葡萄酒学院

[2] 中国科学院微生物研究所

来源：

农业生物技术学报 | 2006年 / 04期

关键词：

酒酒球菌; 苹果酸-乳酸酶基因; 苹果酸通透酶基因; 重组表达质粒; 表达; 酿酒酵母;

D O I：

暂无

中图分类号：

TS261.11 []; Q789 [基因工程的应用];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

利用西北农林科技大学葡萄酒学院筛选出的酒酒球菌(Oenococcusoeni)优良菌系SD-2a的包含苹果酸-乳酸酶基因(mleA)和苹果酸通透酶基因(mleP)约2.6kb的基因片段,并以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以酵母-大肠杆菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒pYELmleAP,转化酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)YS58,筛选获得酵母转化子YS58/pYELmleAP。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中,SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了苹果酸-乳酸酶的目的蛋白。对酵母转化子培养上清进行HPLC检测,采用t检验差异显著性分析,结果表明mleA基因在受体菌中进行了功能性表达。获得的酵母转化子在添加L-苹果酸的SD/-Ura培养基中培养4d,培养液中的L-苹果酸含量降低,培养液上清中L-苹果酸的剩余含量比空载体转化子极显著降低,苹果酸降低19.33%～19.42%。对照未检出乳酸的生成,供试的转化子L-乳酸生成量为1249～1368mg/L,与对照差异显著。

引用

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