用PCR法从cDNA文库中快速克隆基因

被引：9

作者：

刘建喜

林爱星

李雪辉

陈新荣

陈永福

机构：

[1] 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室

[2] 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京

[3] 北京

来源：

农业生物技术学报 | 2001年 / 03期

关键词：

PCR; 5'和3'cDNA末端; 克隆; rsp10;

D O I：

暂无

中图分类号：

S188 [农业生物工程];

学科分类号：

071007 ; 0828 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

以　ｇｔ１１为载体，构建家兔睾丸文库。平板扩增６×１０～５ｐｆｕｓ，提取　ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板。根据ＧｅｎＢａｎｋ已发表ｓｐ１０ｃＤＮＡ的同源序列，选择高度保守区域设计５＇端引物（ＳＰ５＇），另加与构建文库载体λｇｔ１１序列互补的正向（ＥＰ）或反向引物（ＲＰ）共同配对组成ＰＣＲ循环引物。利用ＳＰ５＇＋ＲＰ或ＳＰ５＇＋ＦＰ引物对扩增出ｓｐ１０ｃＤＮＡ的３＇端．根据３＇端的测序结果，设计ｓｐ１０的３＇端引物（ＳＰ３＇），利用ＳＰ３＇＋ＲＰ或ＳＰ３＇＋ＦＰ引物对扩增出ｓｐ１０ｃＤＮＡ的５＇端．应用该方法成功地克隆了家兔精子膜蛋白ｓｐ１０ｃＤＮＡ（ｒｓｐ１０），说明该方法是一种快捷可行的ｃＤＮＡ克隆方法。

引用

页码：279 / 281+309 +309

页数：4