低氧激活巨噬细胞内NF-κB信号转导通路的机制

利用离体培养的巨噬细胞(macrophage)低氧培养模型(1％O2,5％CO2),采用2’,7’-二氯荧光乙酰乙酸盐(2’,7’-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光分光光度法、Western blotting法和逆转录酶链反应(reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)法,观察低氧后细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、IκBα的酪氨酸(Tyr)磷酸化水平、P65mRNA转录水平以及细胞核内NF-κB(nuclear factor kappa B)激活量的变化,探讨低氧激活NF-κB信号转导通路的机制。结果表明,低氧后细胞内ROS水平、IαBα的Tyr磷酸化水平和细胞核内NF-κB的激活量均高于对照组(P<0.05),并且有时间变化趋势上的先后关系,如先用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC,500 μmol/L)和Tyr蛋白激酶抑制剂genistein(200μmol/L)预处理,低氧后细胞内IκBα的Tyr磷酸化和NF-κB;活化分别比单纯低氧组下降(P<0.01);另外,低氧后P65 mRNA转录水平也明显增加(P<0.01)。以上结果提示,低氧可能通过细胞内产生ROS,使IκBα的Tyr位点磷酸化,进而使NF-κB活化;另外,NF-κB活性调节除受抑制性亚基IκBα的磷酸化调控外,还可能表现在NF-κB分子各亚基基因自身的转录调控上。