新生大鼠缺氧缺血性脑损伤与肿瘤坏死因子基因表达的研究

目的研究肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）α在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）后脑内基因转录水平的变化。方法制备左脑ＨＩＢＤ的新生大鼠模型。利用反转录聚合酶链反应（ＲＴ ＰＣＲ）技术检测新生大鼠ＨＩＢＤ后不同时间海马、皮质ＴＮＦ α基因转录水平的表达，经凝胶成像及分析系统扫描ＲＴ ＰＣＲ扩增产物，以内参照半定量分析ＴＮＦ αｍＲＮＡ的动态变化。系列稀释的总ＲＮＡ经ＲＴ ＰＣＲ扩增后行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定产物特异性。结果（１）ＲＴ ＰＣＲ技术敏感特异，最低可检出１００ｆｇ总ＲＮＡ，ＲＴ ＰＣＲ扩增产物只能特异地与其相应核酸探针杂交。（２）ＨＩＢＤ后１小时ＴＮＦ αｍＲＮＡ开始增高，其高峰表达时间为ＨＩＢＤ后６小时，５天基本恢复至正常水平，高峰表达时左脑皮质、海马ＴＮＦ αｍＲＮＡ水平分别为正常组的４３～５２倍（Ｐ＜０．０１），为右脑的２５～３５倍（Ｐ＜０．０１）。损伤侧海马表达明显高于皮质（Ｐ＜０．０１）。结论ＴＮＦ α在ＨＩＢＤ后早期出现转录，可能在ＨＩＢＤ发病过程中起重要作用。