人乳铁蛋白基因在昆虫细胞中的表达

将人乳铁蛋白ｃＤＮＡ（ｈＬＦｃ）克隆在质粒ｐＢａｃＰＡＫ８的ＢａｍＨＩ和ＳａｃＩ位点，构建成转移质粒ｐ８ｈＬＦｃ。该质粒ＤＮＡ与ＡｃＮＰＶＢａｃＰＡＫ６病毒株基因组ＤＮＡ经共转染草地夜峨（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）培养细胞Ｓｆ－２１，在培养的贴壁细胞中挑出空斑，经过３轮纯化，结合斑点杂交筛选，获得重组病毒。用蛋白质免疫印迹法检测到在重组病毒感染的Ｓｆ－２１细胞中存在乳铁蛋白基因的表达产物。酶联免疫检测结果表明：重组人乳铁蛋白在感染后细胞的可溶性蛋白质中含量为２％，在细胞培养上清液中含量为９．５ｍｇ／Ｌ。经亲和层析纯化后的重组蛋白质在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和人乳铁蛋白标准品的电泳迁移率基本一致。紫外光Ａ２８０与可见光Ａ４６５的吸收比值测定表明重组人乳铁蛋白具有结合铁离子的能力。