淫羊藿甙逆转地塞米松抑制成骨细胞分化及其机制

目的研究淫羊藿甙对地塞米松诱导的成骨细胞分化抑制的作用及其分子机制。方法采用0.25%胰蛋白酶和0.1%Ⅱ型胶原酶两步消化法,由出生24h以内的新生SD大鼠头盖骨分离成骨细胞,用含10%胎牛血清的DMEM培养；细胞80%～90%汇合时改用含0.2%牛血清白蛋白的DMEM孵育12h后分组试验,抑制试验在丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MEK)抑制剂PD89059预培养1h后加入相关干预药物,pNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR检测相关基因表达,Westem印迹检测蛋白表达及磷酸化水平。结果(1)与对照组比较,1μmol/L的地塞米松显著抑制成骨细胞ALP活性(0.72±0.05vs 0.78±0.03,P＜0.05)；20μg/L淫羊藿甙对成骨细胞ALP活性具有促进作用(0.91±0.07vs 0.78±0.03,P＜0.05),并逆转了地塞米松对成骨细胞ALP活性的抑制作用(0.83±0.04vs 0.72±0.05,P＜0.05)。(2)与对照组比较,1μmol/L地塞米松刺激MKP-1、RANKL mRNA表达,抑制GSK-3B、OPG mRNA表达,20μg/L淫羊藿甙的作用与之相反,两者共同作用时,淫羊藿甙能逆转地塞米松的作用。(3)1μmol/L地塞米松抑制细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化,1h达峰值；20μg/L淫羊藿甙刺激ERK磷酸化,峰值在10min。(4)MEK抑制剂PD98059显著降低20μg/L淫羊藿甙刺激ERK磷酸化的同时,降低了其刺激的ALP活性。结论淫羊藿甙可以逆转地塞米松抑制的成骨细胞分化,这种作用可能与丝裂原激活的蛋白激酶途径有关。