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应用反转录聚合酶链反应扩增新城疫病毒融合蛋白基因
被引：3
作者：
吴艳涛
刘秀梵
刘伟忠
张如宽
机构：
[1] 扬州大学农学院畜禽传染病农业部部级重点实验室
来源：
关键词：
新城疫病毒；融合蛋白；基因；聚合酶链反应;
D O I：
暂无
中图分类号：
Q78 [基因工程（遗传工程）];
学科分类号：
071007 ;
0836 ;
090102 ;
摘要：
本研究根据已发表的新城疫病毒（ＮＤＶ）核苷酸序列资料，设计了一对大小为２８ｂｐ的融合蛋白（Ｆ）基因上、下游引物。以提纯的ＮＤＶＦ４８Ｅ８株、Ｌａｓｏｔａ株和Ｕｌｓｔｅｒ株的基因组ＲＮＡ为模板，在禽反转录酶和Ｆ基因上游引物作用下，合成单链ｃＤＮＡ。再以ｃＤＮＡ为模板，由聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了三毒株的Ｆ基因。本研究还将Ｆ４８Ｅ８株的Ｆ基因ＰＣＲ产物克隆到质粒ｐＵＣ１９中，并筛选到阳性克隆ｐＦ３７。经限制性内切酶分析，ｐＦ３７的ＰｓｔⅠ、ＥｃｏＲＶ、ＳｍａⅠ等酶切位点与国外报道的其它ＮＤＶ毒株Ｆ基因相一致。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交试验表明，ｐＦ３７与Ｄｅ－ｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的Ｆ基因核酸探针呈强阳性反应
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