亚硒酸钠对体外培养皮质神经元的致凋亡作用及相关基因表达的改变附视频

目的与方法：用不同浓度的亚硒酸钠加入原代培养两天的新生小鼠大脑皮质神经细胞，在不同时间用形态学、分子生物学、和流式细胞仪技术观察亚硒酸钠诱导离体神经元凋亡时间过程和量－效反应关系；观察亚硒酸钠引发凋亡时相关基因表达的改变。结果：（１）用荧光细胞核染料ＰＩ染色，在荧光显微镜下观察到，亚硒酸钠处理后１ｈ神经元的核染色体开始聚集，２ｈ神经元异染色体边集，并伴有核沟和大小不同的核片块生成；随着作用时间的延长，细胞核呈哑铃形等多种不规则形，且核片块增多。（２）琼脂糖凝胶电泳的分析表明，除对照组外，在亚硒酸钠处理的几个时间点都出现了神经元凋亡的特征性改变－ＤＮＡ梯型；有明显的时间一剂量依赖性，以０．５μｍｏｌ亚硒酸钠处理后２４ｈ最明显；这些改变在核酸内切酶抑制剂ＡＴＡ和亚硒酸钠同时加入时都有不同程度的减弱或消失。（３）用流式细胞仪对每个样品分析１００００细胞得到的ＤＮＡ含量直方图表明，亚二倍体峰的出现与亚硒酸钠呈明显的剂量和时间依赖性，其变化趋势与琼脂糖凝胶电泳结果相吻合。（４）用ＲＴ－ＰＣＲ检测技术显示，与细胞凋亡密切相关的ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的量在亚硒酸钠处理后１ｈ明显减少，以后缓慢降低，２４ｈ达最低点，而ｂａｘ、ｐ