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发根农杆菌A4菌株转化苜蓿悬浮培养物
被引：8
作者：
徐子勤
贾敬芬
胡之德
机构：
[1] 兰州大学生物系细胞生物学研究室和化学系
来源：
基金：
中国博士后科学基金;
关键词：
悬浮培养物，转化，苜蓿（MedicagosativaL．），发根农杆菌，高渗预处理;
D O I：
10.13345/j.cjb.1997.01.010
中图分类号：
S551.7 [];
学科分类号：
0901 ;
摘要：
将苜蓿无菌苗下胚轴切割后，在附加２ｍｇ／Ｌ２，４ Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加０５ｍｇ／Ｌ２，４ Ｄ的ＳＨ培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前，用０４５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇处理１ｈ，然后用０１６ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用ＳＨ培养基悬浮（１０ｍｌ／ｇ悬浮培养物），再加０２ｍｌ农杆菌悬浮液，于２５±２℃共培养２ｄ。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加０５ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分析表明７０％的转化体可以合成农杆碱和甘露碱。染色体观察显示转化组织细胞存在严重的数目和结构变异
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