利用Tn5定位诱变筛选紫云英根瘤菌Exo变种

利用Ｔｎ５定位诱变方法，对质粒ｐＪＢ Ｂ５进行Ｔｎ５插入诱变，得到１０个Ｔｎ５在５９ｋｂＢ５外源片段上有不同插入位点的质粒ＴＮ１ １，ＴＮ１ １２，ＴＮ２ ２，ＴＮ２ ３，ＴＮ３ １，ＴＮ４ １，ＴＮ９ １，ＴＮ１０ １，ＴＮ１３ １，ＴＮ１４ １。将Ｔｎ１ １等分别转移到已经含有不相容质粒ｐＰＨ１ＪＩ的紫云英根瘤菌１０７菌株中，使之发生同源变换。通过抗性选择及表型鉴别，筛选到３株菌落表型干燥（Ｍｕｃ－）的酸性胞外多糖（ＥＰＳ）合成缺陷菌株（Ｅｘｏ－）１０７（ＴＮ２ ２），１０７（ＴＮ１０ １），１０７（ＴＮ１３ １）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析证明这３株变种的Ｔｎ５插入确实是同源交换而不是转座产生，表明经过适当改良的Ｔｎ５定位诱变法可以应用于紫云英根瘤菌Ｅｘｏ－变种的筛选。