人血小板cDNA文库的建立

为建立人血小板ｃＤＮＡ文库，作者用人新鲜血小板悬液纯化血小板，加入变性液作匀浆，经苯酚、氯仿、异丙醇等抽提ＲＮＡ，以所得ＲＮＡ为模板合成ｃＤＮＡ，并将其连接λｇｔ１１臂，用噬菌体包装蛋白“包装”，再进行连续稀释，然后将不同稀释度的噬菌体转染宿主菌Ｙ１０９０。结果：从纯化血小板２．８×１０１２中获得约１．５ｍｇＲＮＡ，其Ａ（吸光度，曾称光密度ＯＤ）２６０ｎｍ／Ａ２８０ｎｍ为１．７２１，ＲＮＡ变性电泳可见１８ｓ和２８ｓ条带，且无ＲＮＡ降解。由该ＲＮＡ合成的第一条ｃＤＮＡ链产量为１．８２μｇ，第二条ｃＤＮＡ链产量为３．７９μｇ，放射自显影显示双链ｃＤＮＡ分子大小范围在０．５～５．０ｋｂ，大部分位于１．０～４．０ｋｂ之间。基因库效价为：总效价１．５２×１０８，重组子效价１．３８×１０８，重组百分比８３．１％；克隆效率６．９０×１０８。