流式细胞术分析血液淋巴细胞免疫表型方法学研究

目的　研究流式细胞术 (FCM)分析血液淋巴细胞免疫表型 (亚群 )方法学因素对实验结果的影响。方法　多参数FCM分析。结果　血液采集后 1h和 6h测定淋巴细胞免疫表型结果差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ,而且批内、批间和总重复性均较好 ,但单核细胞和中性粒细胞表面白细胞共同抗原 (CD45 )表达有差别 (P <0 .0 1)。用荧光 /散射光设门 (Back Gating)和三色荧光 /侧向散射光设门 (CD45 PerCP/SSC Gating)设置淋巴细胞门 (LG)时 ,门中淋巴细胞的百分比和门中淋巴细胞占标本中总淋巴细胞的百分比明显高于散射光设门 (FSC/SSC Gating)。用FSC/SSC Gating和Back Gating分析双色标记淋巴细胞免疫表型结果有显著差别 (P <0 .0 1) ,但Back Gating和T淋巴细胞门 (T Gating)分析T细胞亚群结果大致相同 (P >0 .0 5 )。单色、双色、三色免疫荧光技术分析淋巴细胞免疫表型 (亚群 )结果差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论　FCM分析血液淋巴细胞免疫表型结果受多种因素影响。血液采集后应尽快进行免疫荧光染色和固定 ,最迟不能超过 6h ;CD45 PerCP/SSC Gating和Back Gating分析淋巴细胞亚群优于FSC/SSC Gating ,T Gating对T细胞亚群分析更特异。FCM分析血液淋巴细胞免疫表型 (亚群 )三色优于双色免疫荧光分析 ,单色免疫