玉米雄性不育基因和恢复基因表达载体的构建与鉴定

利用限制性内切酶HindⅢ和XbaⅠ从质粒pZBN上切下含有Zm13启动子和Barnase基因编码区的1．4kb片段．与同样酶切的pDM302大片段相连接，构建成带有Zm13－Barstar－nos3’不育基因的重组质粒pZMS。用HindⅢ和kpnⅠ酶切pZ13，回收1、1kb的Zm13启动子，与同样酶切的pBST相连接，得到重组质粒pZBT。又用HindⅢ和XbaⅠ酶切质粒pZBT，回收1．4kb的小片段，与同样酶切的pDM302大片段相连接。构建成带有Zm13－Barstar－nos3’恢复基因的重组质粒pZRF。用HindⅢ从质粒pBARGUS上切下含抗除草剂基因片段，分别插入到pZMS和pZRF的HindⅢ位点上，构建成带选择记的玉米雄性不育基因表达载体pZMSBAR和恢复基因表达载体pZRFABR。经酶分析和PCR扩增证明，两个载体的构建是正确的。