慢病毒在大鼠胶质瘤细胞基因转导中的应用

被引：3

作者：

林健 ^{[1
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戴学军 ^{[1
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王伟民 ^{[1
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袁振华 ^{[2
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王红梅 ^{[2
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何新舟 ^{[2
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刘茜 ^{[2
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曹晖 ^{[2
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蒋立新 ^{[2
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机构：

[1] 中国人民解放军广州军区广州总医院神经外科

[2] 北京本元正阳基因技术有限公司

来源：

中国微侵袭神经外科杂志 | 2007年 / 08期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

慢病毒载体; 质粒; 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因; 大鼠; 神经胶质瘤; 9L细胞;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的应用慢病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。方法构建慢病毒表达质粒pLenti6/V5-TK并以PCR、酶切及测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将重组质粒与包装混合物(Packaging Mix)共同转染293T细胞生产假病毒颗粒,转染48 h后收集培养上清,用其感染大鼠9L胶质瘤细胞,以抗稻瘟菌素(BSD)筛选出9L-TK细胞。RT-PCR、Western blot方法检测TK基因在9L-TK细胞中的表达。用MTT方法测试更昔洛韦(GCV)对体外培养的9L-TK细胞杀伤效果。结果构建的重组质粒pLenti6/V5-TK经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(TU)/ml。经BDS筛选获得的9L-TK细胞RT-PCR及Western blot结果显示TK基因表达阳性,且GCV对该细胞作用敏感。结论成功利用慢病毒实现了TK基因转导大鼠9L胶质瘤细胞。

引用

页码：358 / 362

页数：5

共 4 条

[1]

9L/F344大鼠脑胶质瘤模型的建立 [J].