人GM—CSFcDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达

被引：9

作者：

姚军

甘人宝

张倩

李载平

机构：

[1] 中国科学院上海生物化学研究所

来源：

生物化学与生物物理学报 | 1996年 / 03期

关键词：

人GM－CSF基因；基因表达；T7启动子；包涵体．;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

071010 [生物化学与分子生物学];

摘要：

从诱导的人胚肺细胞ＨＦＬ株中提取总ＲＮＡ．经ＲＴ－ＰＣＲ反应获取了人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ，ＤＮＡ序列测定表明其顺序与文献报道完全一致。为了获得高效表达，应用ＰＣＲ改造了人ＧＭ－ＣＳＦ的ｃＤＮＡ５’端核苷酸序列，并将改造的人ＧＭ－ＣＳＦ基因插入含Ｔ７启动子的质粒ｐＥＴ－１１ｄ构建成表达质粒ｐＥＴＣ－５，将此质粒转化大肠杆菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）得到表达菌株ＢＬＥＣ４。表达菌株用０．５ｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导２小时后，产生大量重组蛋白并形成包涵体。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳图谱扫描结果表明，ｒｈＧＭ－ＣＳＦ产量占菌体总蛋白量的１６％。ＥＬＩＳＡ和ＴＦ－１细胞培养测定表明，初步纯化和复性的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ具有天然的ｈＧＭ－ＣＳＦ生物活性。

引用

页数：7