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DAPK1基因开放读码序列的克隆、序列分析及诱导Raji细胞凋亡
被引：11
作者：
张海涛
朱振宇
吉琼梅
李秀英
李民友
马涧泉
梁念慈
机构：
[1] 中山大学中山医学院生化教研室,中山大学中山医学院生化教研室,中山大学中山医学院生化教研室,中山大学中山医学院生化教研室,中山大学中山医学院生化教研室,中山大学中山医学院生化教研室,广东医学院生化教研室广东广州,广东医学院生化教研室,广东湛江,广东广州,广东广州,广东广州,广东广州,广东广州,广东湛江
来源：
关键词：
死亡相关蛋白激酶;
细胞凋亡;
甲基化;
Raji细胞;
K562细胞;
D O I：
暂无
中图分类号：
R346 [];
学科分类号：
摘要：
目的 :探讨死亡相关蛋白激酶 (DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用 ,克隆DAPK1基因的开放读码序列 (ORF)。方法 :根据GenBank提供的核苷酸序列 ,自行设计引物 ,用RT -PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF ;用质脂体将pcDNA3 1(+ ) -DAPK1转染到Raji细胞 ,Hoechst 3 3 2 58染色观察细胞凋亡 ,MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响。结果 :DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T ,测序鉴定 ;分析结果显示 ,从K562细胞成功扩增 43 0 0bp的DAPK1基因ORF有 7处突变 ,其中 6处是同义突变 ,1处是基因的单链核苷酸多态性 ;DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,转化到Raji细胞 ;转染 48h后 ,可以检测到DAPK1的表达 ,并可以观察到细胞发生凋亡。结论 :大片段的基因可以采用RT -PCR法直接克隆 ,采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞 ;成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF ,过表达的DAPK1基因可以诱导Raji细胞凋亡
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