植物青枯病原细菌胞外蛋白相关基因的克隆

用含有转座子Ｔｎ５ 的铜绿假单胞杆菌ＰＡＯ１８２６（ｐＭＯ７５ ∷Ｔｎ５ ，Ｋｍｒ） 诱变我国马铃薯青枯菌小种３ 号菌株ＰＯ４１ ，获得６０００ 多个胞外多糖正常产生的接合子。经ＳＤＳＰＡＧＥ 电泳，筛选出２ 个胞外蛋白减少９ 种的突变株ＰＭ２６４４ 和ＰＭ２３９ ，其可以引起烟草叶片典型的过敏性反应，致病力比野生型菌株显著降低，皆为原养型菌株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交的结果表明，突变株染色体上只有１ 个转座子插入位点。标记交换证明，９ 种胞外蛋白缺失与转座子插入相偶联的频率为１００ ％ 。以聚半乳糖醛酸酶和内葡聚糖酶２ 种胞外酶为指示蛋白进行定量测定的结果表明，在突变株上清液中和菌体细胞内都没有这２种胞外酶的存在。以突变株ＰＭ２６４４ 为受体菌，通过基因功能互补的方法，从野生型青枯菌基因文库筛选到２ 个阳性克隆ｐＰＳＰ１ 和ｐＰＳＰ２ ，它们既能恢复２ 个突变株产生胞外蛋白的能力，也能将２ 个突变株的致病力恢复到接近野生型菌株的水平。