核糖核酸干扰基质金属蛋白酶-3基因对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究靶向大鼠基质金属蛋白酶-3基因的小干扰核糖核酸(si RNA)对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:构建靶向自发性高血压大鼠基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的三对核糖核酸(RNA)干扰序列。将体外培养的血管平滑肌细胞随机分为对照组、Lipofectamine 2000(转染试剂)组、MMP-3-si RNA-1组、MMP-3-si RNA-2组、MMP-3-si RNA-3组,以Lipofectamine 2000分别转染血管平滑肌细胞,48 h后,以实时定量聚合酶链反应(PCR)检测血管平滑肌细胞MMP-3信使核糖核酸(m RNA)的表达水平,筛选干扰效率最高的si RNA作为实验对象。血管平滑肌细胞随机分为4组:对照组、血小板源生长因子(PDGF)组、Lipofectamine 2000+PDGF组及MMP-3-si RNA-1+PDGF组;用si RNA转染体外培养的血管平滑肌细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测血管平滑肌细胞增殖。结果:实时定量PCR显示,三对互补干扰片段均有不同程度的干扰效果,与对照组比较,MMP-3-si RNA-1组、MMP-3-si RNA-2组和MMP-3-si RNA-3组的m RNA水平明显降低,分别降低了81%、64%和22%。以MMP-3-si RNA-1组的干扰效率最高。蛋白免疫印迹法分析结果亦显示MMP-3-si RNA-1组的干扰效率最高。四甲基偶氮唑盐比色法检测吸光度值结果显示,与PDGF组相比,MMP-3-si RNA-1+PDGF组转染能显著降低PDGF诱导血管平滑肌细胞增殖的吸光度值,抑制率为36.1%(P<0.05),差异有统计学意义。结论:靶向MMP-3基因si RNA序列,能显著降低平滑肌细胞MMP-3 m RNA和蛋白水平,抑制细胞增殖。靶向MMP-3基因干扰RNA可能成为血管增殖性疾病治疗的新靶点。