目的:建立一种反相高效液相色谱分析方法,同时测定小柴胡汤中黄芩苷和甘草酸的含量。方法:采用Agilent Zorbax SB C18柱(4.6mm×250mm,5m),以乙腈-0.01%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL/min.柱温25℃,检测波长为250nm。结果:黄芩苷和甘草酸单铵盐在50min内即实现良好分离,黄芩苷浓度在12.66~405.0g/mL线性范围内呈良好的线性关系,其回归方程为:Y=19.726X+13.972,r= 0.9998。甘草酸在1.988~63.60g/mL的线性范围内呈良好的线性关系,其回归方程为:Y=10.765X+ 6.6433,r=0.9997。两种成分精密度试验RSD<1%;48h内稳定性试验RSD<1%;加样回收率试验RSD<2%。结论:该方法简便快速、准确可靠,能同时测定小柴胡汤中黄芩苷及甘草酸两种有效成分的含量,为有效控制小柴胡汤的质量提供参考。